Avaliação cirúrgica e laboratorial da utilização de pericárdio homólogo em lesões por abrasão em serosa de cólon maior (flexura pélvica) de equinos / Surgical evaluation and laboratory use of homologous pericardium in serous injuryby abrasion of large colon (pelvic flexure) of horses

Aderências intra-abdominais são complicações de cirurgias de equinos que podem resultar em processos obstrutivos e comprometer a sobrevida dos animais. O presente estudo utilizou dez equinos hígidos, machos, sem raça definida (SRD), com quatro a 15 anos de idade e peso vivo situado entre 300 e 400 quilogramas (kg). Os animais foram submetidos à laparotomia esquerda em estação com o objetivo de serem induzidas aderências, testar a utilização intestinal de membrana biológica de pericárdio como prevenção e avaliar as diferentes alterações sistêmicas e do líquido abdominal. Após sedação e analgesia local, foi utilizado o acesso cirúrgico em grade, na flexura pélvica foi criada uma área de abrasão que, no Grupo 1, foi coberta por pericárdio homólogo e no Grupo 2, lavada com solução fisiológica. Após reposicionamento foi realizada a sutura muscular, de subcutâneo e pele. O pós-operatório constou de avaliações clínicas, citologia do líquido abdominal, hematologia e bioquímica sérica nos momentos M0- pré-operatório e M7, M14, M21 e M28 dias de pós-operatório. Nova laparotomia foi realizada aos 30 dias para verificar aderências, aspecto e biópsia intestinal. A técnica cirúrgica possibilitou menor trauma e campo operatório restrito. A evolução clínica foi satisfatória e cicatriz fibrosa foi identificada entre os planos musculares. Aderências não foram observadas. As avaliações laboratoriais demonstraram aumento de bilirrubinas, hematócrito, monócito, ureia sanguíneos e de proteína, densidade e leucócitos segmentados no líquido peritoneal. Conclui-se que a abrasão foi insuficiente para promover aderências fibrosas. O implante, sem comprovada eficácia, é viável e possível, por não resultar em diferenças laboratoriais significativas ou alterações deletérias.

Intra-abdominal adhesions are equine surgery complications, which can result in obstructive processes and jeopardize the survival of these animals. The present study used 10 healthy, male mongrel horses (SRD), with four and 15 years of age and weighing between 300 and 400 kilograms (kg), who underwent laparotomy left station with the aim of inducing adhesions, test intestinal membrane using pericardium as prevention and evaluating the different systemic changes and the abdominal fluid. After sedation and local anesthesia, the surgical approach was used in grade; pelvic flexure was created in an area of abrasion that in Group 1 was covered by homologous pericardium and in Group 2, washed with saline. After repositioning muscle, the skin and subcutaneous tissue were sutured. Postoperative care consisted of clinical evaluation, abdominal fluid cytology, hematology and serum biochemistry in moments M0- preoperative, and M7, M14, M21 and M28 days postoperatively. New laparotomy was performed at 30 days from the surgery to verify adhesion, appearance and intestinal biopsy. The surgical technique allowed less trauma and restricted operative field. The clinical course was satisfactory, and fibrous scar was identified between the muscle planes. Adhesions were not observed. Laboratory evaluations showed increased bilirubin, hematocrit, monocyte, blood urea and protein density and segmented leukocyte peritoneal fluid. The present study concluded that the abrasion was insufficient to promote fibrous adhesions. The implant without proven efficacy is feasible and possible, and does not result in significant differences laboratory or deleterious changes.

Aspectos histopatológicos das lesões renais em gatos experimentalmente infectados pelo vírus da imunodeficiência felina / Histopathological aspects of renal lesions in cats experimentally infected with feline immunodeficiency virus

A infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) em gatos domésticos é caracterizada por distúrbios imunológicos, que geralmente se manifestam tardiamente na doença. Semelhante à infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) em humanos, a infecção pelo FIV geralmente está associada a infecções oportunistas e ao desenvolvimento progressivo de nefropatia. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar as alterações histopatológicas em rins de 10 gatos experimentalmente infectados pelo FIV submetidos a eutanásia 60 meses após a inoculação viral. Nos rins de 100% dos gatos infectados pelo FIV foram visualizadas lesões glomerulares e tubulointersticiais. As lesões glomerulares eram caracterizadas principalmente por espessamento global ou segmentar da membrana basal glomerular (glomerulonefrite membranosa). Glomeruloesclerose e, em dois casos, proliferação de células epiteliais intraglomerulares (crescente glomerular), também foram observados. Nefrite intersticial linfoplasmocítica foi a alteração tubulointersticial mais frequente, visualizada em diferentes intensidades nos rins de 100% dos gatos. Os resultados do presente estudo demonstram que o tempo prolongado entre a infecção e a avaliação histopatológica pode ter sido decisivo para o surgimento das lesões renais em todos os gatos infectados pelo FIV e para o agravamento dessas lesões em alguns gatos...

The feline immunodeficiency virus (FIV) infection in domestic cats is characterized by immunological disorders that commonly manifest in a later stage of the disease. Similarly to the human immunodeficiency virus (HIV) infection in humans, FIV infection is commonly associated with opportunistic infections and progressive development of nephropathies. Therefore, the aim of the present study was to perform histological evaluation of the kidneys of 10 cats experimentally infected with FIV and euthanized at 60 months after viral inoculation. In the kidneys of 100% of the cats infected with FIV, glomerular and tubulointerstitial lesions were seen. The glomerular lesions were mainly characterized by global or segmental thickening of the glomerular basement membrane (membranous glomerulonephritis). Glomerulosclerosis, and in two cases, proliferation of intraglomerular epithelial cells (glomerular crescent) were also observed. The intersticial lymphoplasmacytic nephritis was the tubulointerstitial alteration most frequent and was observed in different intensity levels in 100% of the cats. The results of the present study demonstrate that the prolonged time between infection and histopathological evaluation may have been decisive for the arising of renal lesions in all cats infected with FIV and for the increase of these lesions in some cats...

Estudo morfofuncional dos rins de cães da raça Golden Retriever afetados pela distrofia muscular (GRMD) / Morphofunctional study in kidneys of Golden Retriever dogs affected by muscular dystrophy (GRMD)

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma miopatia severa de caráter recessivo ligada ao cromossomo X e o modelo animal de estudo mais relevante é o Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD). Além das severas alterações que ocorrem na musculatura estriada, muitos estudos mostram que outras estruturas, inclusive viscerais, podem se mostrar alteradas nesta patologia. Desta forma, este trabalho objetivou análisar e comparar possíveis alterações estruturais e funcionais do rim em cães GRMD. Neste modelo de estudo, foi possível observar a presença das faces convexa e côncava, do hilo renal e dos pólos craniais e caudais dos rins. O órgão mostrou-se envolto por uma cápsula fibrosa. Em um corte sagital do órgão, notou-se a presença das regiões cortical e medular e da pelve renal. Na análise microscópica foi possível identificar a zona medular e cortical com suas estruturas: os corpúsculos renais formados pelo glomérulo e pela cápsula de Bowman, os túbulos contorcidos proximais e distais, os ductos coletores, vasos sanguíneos e os segmentos das Alças de Henle. As dosagens séricas de creatinina e uréia encontram-se dentro dos limites de normalidade. Desta forma, de acordo com os nossos resultados, podemos concluir que os animais afetados estudados, não apresentaram alterações estruturais ou funcionais dos rins, o que nos permitir sugerir que apesar da ingestão hídrica comprometida, a estrutura renal, mantem- se preservada nos animais GRMD.

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe myopathy of recessive X-linked character and the most relevant animal study model is the Golden Retriever muscular dystrophy (GRMD). In addition to the severe changes occurring in the striated musculature, several studies show that other structures, including viscera, may prove to be altered in this pathology. Thus, this study aimed to analyze and compare possible structural and functional alterations of the kidney in GRMD dogs. In this study model, it was possible to observe the presence of convex and concave faces, the renal hilum, and the cranial and caudal poles of the kidneys. The organ was surrounded by a fibrous capsule. In a sagittal section of the organ, the presence of the cortical and medullary regions and the renal pelvis were noticed. On microscopic examination, it was possible to identify the medullary and cortical zones and their structures: the renal corpuscles formed by the glomerulus and Bowman's capsule, the proximal and distal convoluted tubules, the collecting ducts, the blood vessels, and the segments of the loops of Henle. The serum creatinine and urea were within normal limits. Thus, according to our results, we may conclude that the affected animals under study showed no structural or functional changes in the kidneys, something which allows us to suggest that, despite the impaired water intake, renal structure remains preserved in GRMD animals.

Experimental infection with Neospora caninum in pregnant bitches / Infecção experimental com Neospora caninum em cadelas prenhes

In this study, transplacental transmission of Neospora caninum in bitches at different stages of pregnancy was evaluated. Three bitches were inoculated in the 3rd week and three in the 6th week of gestation with 10(8) tachyzoites of N. caninum (Nc-1 strain). All the infected bitches and at least one of their offspring presented anti-N. caninum antibodies according to the indirect fluorescent antibody test (IFAT > 400). The pups and their mothers were sacrificed and tissues from the central nervous system (CNS), popliteal lymph nodes, skeletal muscle, brain, lungs, heart and liver were analyzed for the presence of N. caninum using the nested polymerase chain reaction (nested PCR), restriction fragment length polymorphism (RFLP) and immunohistochemistry (IHC). The parasite was found in the pups in lymph node, CNS, heart and liver tissues using nested PCR. There was no difference in perinatal mortality between the offspring from bitches infected in the 3rd week of gestation (60%) and in the 6th week (53.8%).

Neste estudo a transmissão transplacentária de Neospora caninum foi avaliada em fêmeas em diferentes estágios de gestação. Três cadelas foram inoculadas na 3ª semana e três na 6ª semana de gestação com 10(8) taquizoítos de N. caninum (cepa Nc-1). Todas as cadelas infectadas, e pelo menos um de seus filhotes, apresentaram anticorpos anti-N. caninum por imunofluorescência indireta (RIFI > 400). Os filhotes e suas mães foram sacrificados e tecidos de sistema nervoso central (SNC), linfonodo poplíteo, músculo esquelético, cérebro, pulmões, coração e fígado foram analisados para a presença de N. caninum pela reação em cadeia da polimerase (nested PCR), polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP) e imunoistoquímica (IHQ). O parasita foi encontrado em filhotes em linfonodo, SNC, coração e fígado pela nested PCR. Mortalidade perinatal não apresentou diferença entre os filhotes das cadelas infectadas na 3ª semana (60%) ou na 6ª semana de gestação (53,8%).

Genotipagem de polimorfismos no gene prnp em ovinos da raça Santa Inês no Estado de São Paulo / Genotyping of polymorphisms in the prnp gene in Santa Ines sheep in the State of São Paulo, Brazil

Scrapie ou paraplexia enzoótica dos ovinos é uma doença neurodegenerativa fatal que acomete ovinos e raramente caprinos. A doença é influenciada por polimorfismos nos códons 136, 154 e 171 do gene prnp que codifica a proteína priônica. Os animais podem ser susceptíveis ou resistentes, de acordo com as sequências alélicas observadas nos referidos códons. No Brasil ocorreram apenas casos de animais que foram importados, sendo o país considerado livre da doença. Neste trabalho foi realizada a genotipagem dos diferentes polimorfismos associados ao desenvolvimento do scrapie e a categorização em animais susceptíveis e resistentes. Foram sequenciadas 118 amostras provenientes de ovinos da raça Santa Inês criados em propriedades localizadas no Estado de São Paulo. Destas amostras foram identificados 6 alelos e 11 genótipos (ARQ/ARQ, ARR/ARQ, ARQ/AHQ, ARQ/VRQ, AHQ/AHQ, ARR/ARR, ARR/AHQ, VRQ/VRQ, ARQ/TRQ, TRR/TRR, TRQ/TRQ), dentre os quais o genótipo ARQ/ARQ teve ocorrência de 56,7%. Em nosso estudo foi detectada a presença da tirosina no códon 136, observação rara na medida em que não existem relatos nacionais e internacionais envolvendo a raça Santa Inês descrevendo este polimorfismo. Com os resultados obtidos, foi possível determinar a existência de grande variabilidade genética relacionada à raça Santa Inês no Estado de São Paulo. Apesar da variabilidade, apenas 1,69% dos genótipos observados mostraram-se extremamente resistentes ao scrapie. Estes dados demonstram que a raça nativa Santa Inês pode ser considerada potencialmente susceptível ao scrapie.

Enzootic paraplexia or scrapie is a fatal neurodegenerative disease affecting mainly sheep and rarely goats. The disease is influenced by polymorphisms at codons 136, 154 and 171 of prnp gene that encodes the prion protein. The animals may be susceptible or resistant to the development of the disease according to the allelic sequences observed in these codons. In Brazil there were only cases of scrapie in imported animals, therefore the country is considered free of the disease. This study performed the genotyping of different polymorphisms associated to the development of scrapie. Then, based on these findings the animals were categorized in resistant and susceptible. A total of 118 samples were sequenced from the Santa Ines sheep raised on properties located in the State of Sao Paulo. From these samples, 6 alleles and 11 genotypes were identified (ARQ / ARQ, ARR / ARQ, ARQ / AHQ, ARQ / VRQ, AHQ / AHQ, ARR / ARR, ARR / AHQ, VRQ / VRQ, ARQ / TRQ, TRR / TRR, TRQ / TRQ), the genotype ARQ / ARQ presented a frequency of 56.7%. It was also detected the presence of tyrosine at codon 136, which may be considered a rare observation, since there is no report regarding Santa Ines breeding presenting this polymorphism. These results showed the great genetic variability in Santa Ines in Sao Paulo and only 1,69% of the genotypes observed are extremely resistant to scrapie. These data demonstrate that the Santa Ines sheep can be considered potentially susceptible to scrapie.

Análise retrospectiva de casos de maus tratos contra cães e gatos na cidade de São Paulo / Retrospective analyzes of cruelty toward dogs and cats in the city of São Paulo

A Medicina Veterinária Legal é uma área em crescimento devido à demanda da sociedade na coibição dos crimes contra a fauna. No Brasil, pouco se conhece acerca da magnitude deste problema. Assim, o presente estudo propôs-se a realizar um levantamento de casos em dois órgãos distintos que lidam com esta modalidade de crime em sua rotina de atendimento: o Serviço de Necropsia do Departamento de Patologia da FMVZ/USP e o Núcleo de Análise Instrumental do Instituto de Criminalística de São Paulo (NAI/IC). Este levantamento possibilitou a visualização do perfil quantitativo e qualitativo dos casos atendidos de maus tratos praticados contra cães e gatos, no período de 2003 a 2007. Constatou-se inicialmente que o número absoluto de casos de maus tratos em cães é maior que em gatos, porém, o confronto desses números absolutos com o tamanho da respectiva população atendida pelo Serviço de Necropsia da FMVZ/USP, revelou que os gatos são animais de eleição para as práticas de maus tratos. Constatou-se ainda que o sexo do animal não é fator relevante nessa eleição, mas a idade sim. Isso pode ser devido ao fato de animais de tenra idade serem mais indefesos que animais adultos. O tipo de maus tratos mais comumente praticado, tanto em cães como em gatos, é a intoxicação intencional e, os agentes tóxicos mais utilizados nestes casos são os carbamatos. Os resultados obtidos sugerem que a ampla utilização dos carbamatos decorre da facilidade com que podem ser adquiridos no comércio e fornecidos aos animais.

The area of Legal Veterinary Medicine is growing due to the demand of society in restraining crimes against wildlife. In Brazil, little is known about the magnitude of this problem. Thus, this study set out to do a survey of cases in two separate bodies dealing with this type of crime in their routine care: the Autopsy Service, Department of Pathology FMVZ / USP and the Instrumental Analysis Center of the Institute Forensic São Paulo (NAI / IC). This survey enabled the visualization of a qualitative and quantitative profile of the seen cases of abuse committed against dogs and cats in the period 2003 to 2007. The conclusions are: cats are more affected than dogs by the practice of maltreatment; there is no difference regarding sex, but age is a determinant factor, therefore young animals are predominantly maltreated; and the agents most commonly used to cause intentional poisoning are carbamates.

Patologia de neonatos bovinos originados por meio da técnica de transferência nuclear de células somáticas: clonagem / Pathology of bovine neonates generated by somatic cell nuclear transfer: cloning

Os mecanismos de morte em animais clonados a partir de células somáticas são poucos elucidados. Malformações de órgãos, alterações de tamanho e peso desses animais foram anomalias já descritas, porém em casos isolados. Desse modo, estudos nos níveis anátomo e histopatológicos são de suma importância para ajudar a compreensão dos fatores responsáveis pelos altos índices de insucessos com a utilização da TNCS (transferência nuclear de células somáticas). Assim, o presente trabalho foi realizado com o objetivo de descrever, por meio de exames anatomopatológicos, as alterações presentes em um grupo de animais gerados por TNCS, que vieram a óbito entre 1 e 19 dias de vida. Esse experimento foi realizado entre os anos de 2004 e 2008 na fazenda Tambaú, cidade de Tambaú, Estado de São Paulo. No total foram gerados 21 animais da raça Nelore (Bos indicus), sendo que 11 vieram a óbito e dez apresentaram boa evolução clínica no período perinatal. Foram realizadas as necropsias dos animais e posterior análise histopatológica de tecidos alterados. Esse estudo mostrou alta prevalência de alterações cardiopulmonares, que provavelmente foram determinantes nos mecanismos de morte dos animais. Dentre essas alterações a hipertensão pulmonar e modificações hemodinâmicas diagnosticadas através do exame histopatológico foram as mais frequentes.

The death mechanisms in cloned animals are not well elucidated. There are few cases describing organ malformation, size and weight alterations in these animals. Pathologic studies are necessary to understand the high level of unsuccessful results using the NTSC (nuclear transfer somatic cell) technique. The present study was carried out to describe alterations present in a group of animals generated by NTSC technique that deceased between 0 to 19 days of life, using anatomopathologic examination. This experiment was conducted at Tambaú Farm in São Paulo State between years 2004 and 2008. Initially there were twenty one Nelore breed Bos indicus animals, but 11 of them deceased and ten survived and showed satisfactory clinical evolution in perinatal period. Animals necropsies and histopathologic analyses where performed. The results revealed a high prevalence of cardiopulmonary alterations, which were predominantly lung hypertension and hemodynamic profile changes, revealed by histopathologic analyses.

Effects of Buchenavia tomentosa consumption on female rats and their offspring / Efeitos do consumo de Buchenavia tomentosa em ratas e em suas proles

Buchenavia tomentosa Eichler is a common plant in Brazilian cerrado. Fruits of this plant are employed in human feeding and folk medicine. Cattle producers affirm that consumption of the fruits cause abortion in cows, and even death. Considering that the plant may be consumed by pregnant women and animals, the present study was undertaken to evaluate the possible toxic effects of the ingestion of B. tomentosa fruit (10% added to the diet), from the first to the twenty-first days of gestation, on reproductive parameters and on physical and neurobehavioral development of rats offspring. An increase in food consumption at pregnancy days 11 and 17, and weight increase at day 17 of pregnancy were observed. Besides that, we verified an increase in weight of male offspring on post natal day 1. Other parameters were not affected by plant consumption. These results indicate that the consumption of B. tomentosa at 10% during pregnancy cause slight toxicological effects. The changes verified in the present study indicate toxic action of the fruit possibly induced by flavonoids with hormonal action; however, further studies must be accomplished to corroborate this hypothesis.

Buchenavia tomentosa Eichler é uma planta típica do cerrado brasileiro. Os frutos desta planta são empregados na alimentação humana e medicina popular. Criadores de bovinos afirmam que o consumo desta planta produz aborto em vacas bem como a morte destes animais. Uma vez que a planta pode ser consumida pelo homem e animais, em idade fértil e inclusive gestantes, o presente estudo avaliou os possíveis efeitos tóxicos da ingestão de dieta com 10% de frutos de B. tomentosa do primeiro ao vigésimo primeiro dia de gestação sobre os parâmetros reprodutivos e sobre o desenvolvimento físico e neurocomportamental das ninhadas de ratos. Foram observadas elevações no consumo de alimentos nos dias 11 e 17 de gestação e no peso ao dia 17 de gestação. Aumento do peso dos filhotes machos foi verificado no primeiro dia após o nascimento. Outros parâmetros não foram afetados pelo consumo da planta. Estes resultados indicam que a ingestão, durante a gestação, de uma dieta acrescida com 10% de B. tomentosa causa efeitos tóxicos leves. As alterações verificadas no presente estudo indicam ação tóxica do fruto possivelmente induzidos por flavonoides de ação hormonal; no entanto, estudos detalhados devem ser conduzidos para garantir esta hipótese.

Remyelination in experimentally demyelinated connexin 32 KnockOut mice / Remielinização em camundongos KnockOut para conexina 32 desmielinizados experimentalmente

The aim of this study was to evaluate the role of connexin 32 (Cx 32) during remyelination of the peripheral nervous system, through a local injection of either 0,1 percent ethidium bromide solution or saline in the sciatic nerve of Cx 32 knockout mice. Euthanasia was performed ranging from 1, 2, 3, 7, 15, 21 to 30 days after injection. Histochemical, immunohistochemical, immunofluorescence and transmission electron microscopical techniques were used to analyze the development of the lesions. Within the sciatic nerves, Schwann cells initially showed signs of intoxication and rejected their sheaths; after seven days, some thin newly formed myelin sheaths with uneven compactness and redundant loops (tomacula) were conspicuous. We concluded that the regeneration of lost myelin sheaths within the PNS followed the pattern already reported for this model in other laboratory species. Therefore, these results suggest that absence of Cx 32 did not interfere with the normal pattern of remyelination in this model in young mice.

Este estudo visou avaliar o papel da conexina 32 (Cx 32) durante a remielinização no sistema nervoso periférico. Uma injeção local de 0,1 por cento de solução de brometo de etídio foi realizada no nervo ciático de camundongos deletados para a Cx 32, com eutanásia dos animais aos 1, 2, 3, 7, 15, 21 e 30 dias pós-injeção. Avaliações histoquímicas, imunoistoquímicas, por imunofluorescência e por microscopia eletrônica de transmissão foram utilizadas na análise do desenvolvimento das lesões. Nos nervos ciáticos, células de Schwann mostraram inicialmente sinais de intoxicação e rejeitaram suas bainhas. Após sete dias, observaram-se finas bainhas neoformadas, com compactação desigual e alças redundantes (tomácula). Conclui-se que a regeneração de bainhas de mielina perdidas no SNP seguiu o padrão já relatado deste modelo em outras espécies de laboratório. Portanto, estes resultados sugerem que a ausência da Cx 32 não interferiu com o padrão normal de remielinização em camundongos jovens neste modelo.

Emprego da RT-PCR em tempo real para a quantificação da expressão de genes associados à resposta imune em bezerros bovinos experimentalmente infectados por Neospora caninum / Use of the real time RT-PCR for immune related gene expression quantitation in experimentally infected Neospora caninum bovine calves

Neospora caninum é um dos principais agentes causadores de abortamentos e natimortalidade em bovinos. A defesa imune do hospedeiro é capaz de inibir a atividade dos taquizoítos na fase aguda da infecção, mas não age sobre os bradizoítos nos cistos teciduais. A ativação e a modulação dessa resposta de defesa são controladas por mediadores celulares. A técnica do RT-PCR em tempo real foi empregada para a detecção de alguns desses mediadores durante a infecção pelo N. caninum. Foram analisadas amostras de linfonodos poplíteos, fígado e córtex cerebral de bezerros Holandeses e Nelores infectados com taquizoítos por via intramuscular e controles não-infectados, abatidos no sexto dia pós-inoculação. A RT-PCR em tempo real detectou a expressão dos genes em todos os tecidos analisados. Não houve variação significativa na expressão do gene GADPH entre os grupos, a eficiência de amplificação desse foi similar aos demais genes testados e foi empregado como controle endógeno na análise. A comparação entre infectados e não-infectados permitiu a quantificação relativa da expressão gênica. A expressão dos genes IFN-γ e TNF-α apresentou elevação significante em algumas amostras. Os genes iNOS e TGF-β1 apresentaram algumas variações não-significativas e os valores de IL-4 e IL-10 permaneceram praticamente inalterados.

Neospora caninum is one of the main causes of abortion and natimortality in cattle. Host immune defense is capable to inhibit tachyzoite activity during acute infection, but there is no action against bradyzoites in tissue cysts. Activation and modulation of this response is controlled by cell mediators. The real-time RT-PCR technique was employed to detect some of those mediators during N. caninum infection. Holstein and Nelore calves intramuscularly infected with tachyzoites and uninfected controls were slaughtered at the sixth day post-infection and popliteal lymph node, liver and brain cortex samples were analyzed. Real-time RT-PCR detected gene expression in all tissues. No significant variation of GAPDH gene expression was detected among groups, its amplification efficiency was similar to the other genes tested and it was used as the endogenous control for the analysis. Comparisons between infected and uninfected groups allowed the relative gene expression quantification. IFN-γ and TNF-α genes showed increased expression in some samples. iNOS and TGF-β1 genes had some non-significant variations and IL-4 and IL-10 stayed pratically inaltered.

Isolation and characterization of Leptospira interrogans from pigs slaughtered in São Paulo State, Brazil / Isolamento e caracterização de Leptospira interrogans de suínos abatidos no Estado de São Paulo, Brasil

With the aim of isolating Leptospira spp., blood serum, kidney, liver and genital tract of 137 female swine (40 sows and 97 gilts) and also urine samples from 22 sows were collected in a slaughterhouse in the State of São Paulo, from April 2003 to August 2004. Four isolates were obtained from animals that presented microagglutination test (MAT) titers > 100 for the serovar Pomona and one was obtained from an animal negative by MAT in which Leptospira was isolated from the liver and reproductive tract. The presence of leptospiral DNA was investigated by PCR, and positive results were found in kidneys of 11 females, liver of two, genital tract of two and urine of one of them. Nephrosis, interstitial multifocal nephritis, moderate to severe changing, hyalines cylinders and hemorrhagic focuses, hepatic and uterine horns congestion were histological lesions observed in higher frequency in animals positive for leptospira. The silver impregnation (Warthin Starry) confirmed the presence of spirochetes in renal tubules of four females with positive leptospira cultures from kidneys. The serogroup of the five isolates was identified as Pomona by cross agglutination with reference polyclonal antibodies. Molecular characterization of the isolates was carried out by variable-number tandem-repeats analysis. All the isolates revealed a pattern distinct from the L. interrogans Pomona type strain, but identical to a previously identified pattern from strains isolated in Argentina belonging to serovar Pomona.

Amostras de soro sanguíneo, rim, fígado e trato genital de 137 fêmeas suínas (40 matrizes e 97 marrãs) e de urina de 22 matrizes foram colhidas em abatedouro no Estado de São Paulo, no período de abril de 2003 a agosto de 2004 tendo como objetivo o isolamento de Leptospira spp. Quatro estirpes foram isoladas de animais que apresentaram títulos, no teste de soroaglutinação microscópica (SAM) > 100, para o sorovar Pomona e de um animal, não reagente na SAM, em que houve isolamento de leptospiras do fígado e aparelho reprodutor. A presença do DNA de leptospira foi investigada pela técnica da PCR e foram observados resultados positivos nos rins de 11 fêmeas, no fígado de duas, no aparelho reprodutor de duas e na urina de uma delas. Nefrose, nefrite intersticial multifocal variando de moderada a severa, cilindros hialinos e focos hemorrágicos, congestão hepática e de cornos uterinos foram lesões histológicas evidenciadas com freqüência mais alta em animais positivos para leptospira. A impregnação argêntica (Warthin Starry) confirmou a presença de espiroquetas nos túbulos renais das quatro fêmeas onde houve cultura positiva para leptospiras dos rins. O sorogrupo dos cinco isolados foi identificado como Pomona pela técnica de aglutinação cruzada com anticorpos policlonais de referência. A caracterização molecular dos isolados foi realizada pela análise do número variável de repetições em tandem (VNTR). Os mesmos revelaram um padrão distinto da estirpe padrão de L. interrogans sorovar Pomona, porém idêntico a um padrão previamente identificado em estirpes isoladas na Argentina, pertencentes ao sorovar Pomona.

Meningoencefalite necrotizante de cão Maltês / Necrotizing meningoencephalitis of Maltese dog

A Meningoencefalite Necrotizante (MEN) é uma encefalopatia causada por uma disfunção inflamatória de característica necrotizante. O objetivo deste relato é descrever os aspectos clínicos e anatomopatológicos da Meningoencefalite Necrotizante (MEN) em um cão Maltês. A doença tem um caráter necrótico único e está relacionada intimamente à Encefalite do Cão Pug (ECP) devido a suas semelhanças, bem como à Leucoencefalite Necrotizante (LEN). Embora o primeiro relato de caso de ECP tenha mais de 15 anos e o primeiro relato de caso de MEN em Maltês tenha 11 anos, há muito a ser revelado sobre a etiologia e os mecanismos imunopatológicos da doença. Neste trabalho, relata-se o caso de um cão Maltês com sinais que foram compatíveis com a MEN. Foram detectadas nas imagens macroscópicas, cavitação cerebral, e na microscopia, perda de células do parênquima em certas regiões do córtex cerebral. A partir dessas descobertas descreve-se o primeiro caso de MEN em cão Maltês no Brasil.

The Necrotizing Meningoencephalitis (NME) is an encephalopathy caused by an inflammatory dysfunction with necrotic characterization. The aim of this report is to describe the anatomopathological features of the NME in a Maltese dog. The disease has a unique necrotic pattern and is closely related to Pug Dog Encephalitis (PDE) because of their similarity as well as to Necrotizing Leukoencephalitis (NLE). Although the first PDE report has more than 15 years and the first Maltese NME report has 11 years there is a lot to be unveiled about the etiologic and the immunopathologic mechanisms of the disease. Here we report one case of a Maltese dog with signs that were compatible with NME. The gross morphology pictures with the cerebral cavitation and the histological loss of parenchymal cells in some regions of the cerebral cortex were detected. Based on these findings, we describe the first case of NME in Maltese dog in Brazil.

Marcação imunoistoquímica da expressão astrocitária de proteína glial fibrilar ácida e de vimentina no sistema nervoso central de cães com cinomose / Immunohistochemical staining of the astrocytic expression of glial fibrillary acidic protein and vimentin in the central nervous system of dogs with canine distemper

Uma vez que muitos dos aspectos envolvidos na patogenia dos processos desmielinizantes do sistema nervoso central (SNC) são ainda pouco esclarecidos e que os astrócitos parecem estar envolvidos na mediação de tais processos, este estudo analisou morfologicamente a participação astrocitária na desmielinização do SNC por meio da marcação imunoistoquímica de duas proteínas dos filamentos intermediários astrocitários - a proteína glial fibrilar ácida (GFAP) e a vimentina (VIM) -, comparando amostras de cerebelo e de tronco encefálico de oito cães com cinomose e de dois cães normais, de diferentes raças e com idades entre um e quatro anos. Cortes histológicos dos tecidos foram submetidos à marcação pelo método indireto da avidina-biotina-peroxidase (ABC) e a reatividade astrocitária, observada em microscopia de luz, foi quantificada em um sistema computacional de análise de imagens. Observou-se, na maioria dos cortes de animais doentes, a presença de lesões degenerativas compatíveis com desmielinização. A marcação para a GFAP e para a VIM foi mais intensa nos animais com cinomose do que nos animais normais, especialmente nas regiões circunventriculares e nas adjacentes às áreas de degeneração tecidual. Não houve diferença significativa entre a imunomarcação (GFAP e VIM) dos animais com cinomose com e sem infiltração inflamatória da substância branca do cerebelo. O aumento da imunorreatividade dos astrócitos para a GFAP e a reexpressão de VIM nas áreas lesionais indicam o envolvimento astrocitário na resposta do tecido nervoso às lesões desmielinizantes induzidas pelo vírus da cinomose (CDV) no SNC.

Considering that many aspects involved in the pathogenesis of the central nervous system (CNS) demyelinating diseases are still poorly understood and that astrocytes seem to mediate such processes, this study analyzed the participation of astrocytes in the demyelinating processes of CNS by using immunohistochemical staining of two astrocytic proteins - glial fibrillary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM) -, comparing samples of cerebellum and brainstem from eight dogs with canine distemper and from two healthy dogs, from different breeds and ages varying from 1 to 4 years old. Histological sections were submitted to the avidin-biotin-peroxidase indirect method of immmunohistochemical staining (ABC) and the astrocytic reactivity, observed in light microscopy, was quantified in a computer system for image analysis. It was possible to notice, on most of the sections from sick animals, degenerative lesions that indicate demyelination. The immunostaining for GFAP and VIM was more intense on animals with canine distemper, specially around the ventricules and near degenerated sites. There was no significant difference between the immunostaining (GFAP and VIM) of animals with canine distemper with and without inflammatory infiltrate of the cerebellar white matter. The increased immunoreactivity of astrocytes for GFAP and the VIM reexpression in injured areas indicate the astrocytic involvement on nervous tissue response to the demyelinating lesions induced by the canine distemper virus (CDV) in the CNS.

Marcação imuno-histoquímica da resposta macrofágica e astrocitária no tronco encefálico de ratos Wistar submetidos ao modelo gliotóxico do brometo de etídio e tratados com ciclofosfamida / Immunohistochemical staining of the macrophagic and astrocytic response in the brainstem of Wistar rats submitted to the ethidium bromide gliotoxic model and treated with cyclophosphamide

O gliotóxico brometo de etídio (BE) foi utilizado para o estudo da resposta macrofágica e astrocitária sob imunossupressão com ciclofosfamida (CY). Investigou-se a imunorreatividade astrocitária à proteína glial fibrilar ácida (GFAP) e à vimentina (VIM), e a imunorreatividade macrofágica ao ED1 após injeção do BE. Foram utilizados ratos Wistar adultos injetados na cisterna basal com salina a 0,9 por cento (grupo I), BE a 0,1 por cento (grupo II) e BE a 0,1 por cento, imunossuprimidos com CY (grupo III). Fragmentos do tronco encefálico foram colhidos do 1° ao 21° dia pós-injeção para estudo imuno-histoquímico da GFAP, VIM e ED1. Nos grupos II e III, observou-se imunorreatividade aumentada para GFAP e re-expressão de VIM. No grupo II, células ED1-positivas foram observadas a partir do 2° dia e no grupo III, a partir do 3° dia. Aos 14 dias pós-injeção, havia mais células ED1-positivas no grupo III. A CY aparentemente não alterou a resposta astrocitária.

The gliotoxic ethidium bromide (EB) was used to study morphologically the macrophagic and astrocytic response under immunosuppression by cyclophosphamide (CY). Astrocyte immunoreactivity to glial fibrillary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM) and macrophagic immunoreactivity to ED1 were investigated after EB injection. Male Wistar rats were injected with 0.9 percent saline solution (group I), 0.1 percent BE (group II) and 0.1 percent EB associated with CY treatment (group III). Brainstem samples were collected from the 1st to the 21st day post-injection for GFAP, VIM and ED1 immunostaining. In groups II and III, it was observed increased immunoreactivity to GFAP and reexpression of VIM. In group II, ED1-positive cells were noted after the 2nd day and in group III, after the 3rd day. On the 14th day post-injection, it was observed a greater quantity of ED1- positive cells in group III than in group II. Apparently, CY did not change the astrocytic response pattern.

Avaliação epidemiológica, clínica, anatomopatológica e etiológica de surtos de ataxia em cabritos e cordeiros / Epidemiological, clinical, etiological and histopatological evaluation of delayed enzootic ataxia outbreaks in kids and lambs

Nos anos de 2001 e 2002, 46 cabritos (CAB) e 35 cordeiros (COR) de uma propriedade do agreste do Estado de Pernambuco foram acometidos por ataxia enzoótica (AE) de forma tardia. Houve aumento da incidência do 1o ano (46,3 por cento - CAB; 24,2 por cento COR) para o ano subseqüente (100 por cento - CAB e COR). Somente no ano de 2001, houve maior incidência em CAB (P<0,002) que nos COR. Todos os animais acometidos sucumbiram, com exceção de um CAB e um de COR. O quadro clínico variou de acordo com a idade em que surgiram os sintomas, ou seja, de 30 a 45 dias os animais manifestaram paralisia dos membros anteriores e posteriores, acompanhada de espasticidade muscular e morte; com mais de 45 dias, ocorreu paralisia flácida ou espástica apenas dos membros posteriores e morte; somente os cabritos com menos de 45 dias apresentaram movimentos verticais de cabeça. As lesões histopatológicas evidenciadas foram: degeneração axonal, esferóides, gliose e dismielinização no segmento ventral e lateral da medula espinhal. Nos animais com menos de 45 dias, essas lesões foram evidentes na região cervical e nos animas mais velhos na região lombar. Apenas nos cabritos foi constatada lesão degenerativa no cerebelo. A dieta oferecida ao rebanho continha quantidades adequadas de cobre, porém os animais acometidos por AE apresentaram baixos teores de cobre no fígado (45,8mg kg-1 MS). Os elementos antagonizantes do cobre, Mo, S, e Zn, estavam normais, com exceção do ferro, que estava em alta concentração tanto no solo (8600mg kg-1) quanto nos alimentos (284mg kg-1). O excesso de ingestão de ferro sugere ter provocado a carência de cobre nos animais.

Biological and immunological studies ot five Brazilian rabies virus isolates

Estudou-se em camundongos aspectos do comportamento biológico de amostras brasileiras de virus rábico isoladas de cão, bovino, eqüino, morcegos hematófago e insetívoro. Observou-se transmissão oral em camundongos alimentados com cérebros infectados de morcego insetívoro (8,82%), cão (8,57%) e eqüino (3,03%). O período de incubação médio para todas as amostras foi de 6 dias após a inoculação intracerebral, com sintomas variando, desde hiperexitabilidade (amostra canina), paralisia progressiva principalmente de membros posteriores e maior duração do curso clínico até a morte (eqüino) e morte repentina, sem sintomas aparentes (morcego insetívoro). Pela imunoistoquímica detectou-se produção de IFN nos cérebros dos camundongos inoculados com amostra de bovino e morcego insetívoro, TNF e iNOS nos animais infectados com amostra de cão, bovino e morcego insetívoro e reação astrocitária com aumento da expressão de GFAP em todas as cinco amostras. A eficácia de 2 vacinas comerciais inativadas, uma nacional e outra importada, para a proteção contra a infecção experimental em camundongos foi avaliada através dos testes NIH e CDC, usando as amostras de campo para o desafio. Não houve diferença significativa entre o desempenho das vacinas, quando comparadas para um mesmo teste de potência e amostra de desafio sugerindo que não há necessidade de se produzir vacinas com amostras isoladas de campo.

Behaviour of oligodendrocytes and Schwann cells in an experimental model of toxic demyelination of the central nervous system

Oligodendrocytes and Schwann cells are engaged in myelin production, maintenance and repairing respectively in the central nervous system (CNS) and the peripheral nervous system (PNS). Whereas oligodendrocytes act only within the CNS, Schwann cells are able to invade the CNS in order to make new myelin sheaths around demyelinated axons. Both cells have some limitations in their activities, i.e. oligodendrocytes are post-mitotic cells and Schwann cells only get into the CNS in the absence of astrocytes. Ethidium bromide (EB) is a gliotoxic chemical that when injected locally within the CNS, induce demyelination. In the EB model of demyelination, glial cells are destroyed early after intoxication and Schwann cells are free to approach the naked central axons. In normal Wistar rats, regeneration of lost myelin sheaths can be achieved as early as thirteen days after intoxication; in Wistar rats immunosuppressed with cyclophosphamide the process is delayed and in rats administered cyclosporine it may be accelerated. Aiming the enlightening of those complex processes, all events concerning the myelinating cells in an experimental model are herein presented and discussed